消费导刊

      化学发光免疫分析技术是8O年代以来发展起来的一项新的免疫标记技术，可测定内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等项目口]，其以快速、简便、无污染、自动化程度高等特点得以广泛应用。Chem—clin 600是北京科美生物技术有限公司推出的化学发光自动免疫分析仪，测定项目齐，近年在国内推广较快。按照《医学实验室质量和能力认可准则》(ISO15189：2007)的要求，在实验室开始对患者标本进行检测报告结果之前，应对检测系统进行必要的性能确认。只有真正证实了检测系统的分析性能符合临床要求，或与厂商的资料一致，才可以将检测系统用于常规。本文对Chemclin 600检测系统测定HBsAg进行检测低限与功能灵敏度的验证和评价，现报道如下。

1材料与方法

1．1仪器与试剂 Chemclin 600化学发光自动免疫分析仪，乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)测定试剂盒(采用双抗体夹心法原理)，校准品、质控品为北京科美生物技术有限公司原装配套提供。

1．2实验方法
1．2．1标本制备 空白样品：以各种现有方法检测不到HB—sAg数据(且两对半定性五项指标均低于cutoff值)的患者混国际检验医学杂志2013年5月第34卷第1O期 Int J LabMed，May 2013，Vo1．34，No．10合血清作为空白样品(xo)[注：科美试剂盒要求仅限于人血清或血浆样本的测定，故采用仪器检测不到HBsAg数据的患者混合血清作为空白样品]，所有样品均无溶血、黄疸、脂浊。HBsAg系列低浓度实验样品：用空白样品液稀释HBsAg 30ng／mL的定标液(HBsAg Cal5)后再配制一系列接近厂家给出的HBsAg检测低限(即分析灵敏度)的低浓度的HBsAg溶液 稀释分装后冷冻保存于冰箱备用。HBsAg系列低浓度实验样品稀释：HBsAg定标液浓度值为30．0 ng／mL(HBsAg Cal5)，稀释3O倍后理论浓度值为1．0 ng／mL(X6)，再对1．0 ng／mL的样品分别稀释成HBsAg的理论浓度值为0．3 ng／mL(X1)，0．4 ng／mL(X2)，0．5 ng／mL(X3)，0．6 ng／mL (x4)，0．8 ng／mL(X5)；最后把HBsAg定标液30．0 ng／mL稀释25倍后理论浓度值为1．2 ng／mL(X7)。这些系列低浓度样品作为功能灵敏度实验样品。

1．2．2实验前准备 严格按照操作说明书对仪器进行维护保养和质量控制，均符合要求后进行实验。所有实验样品分析前均复融，平衡至室温后开始检测。

1．2．3检测低限(分析灵敏度)确定 连续测定空白样品lOd，计算其均值( )及标准差(s)。按99．7 可能性定义检测低限(LLD)，LLD=A空白+3s空白 j。

1．2．4功能灵敏度实验 连续测定系列低浓度实验样品1Od，记录其发光强度值(RLUs)和浓度值(ng／mI )。计算各组RLUs的均值(j)、标准差(5)和变异系数(c 。绘制浓度与发光强度CV的关系曲线图，以HBsAg检测浓度为x轴，各浓度的CV(RLUs)为Y轴，从曲线上查阅CV为2O 所对应的HBsAg浓度，即为功能灵敏度_2“]。

1．3统计学处理 采用SPSSIO．0统计软件进行数据处理。P<O．05为差异有统计学意义。

2 结  果

【paperpass】2．1 HBsAg分析灵敏度试验结果。

2．2分析灵敏度 为样品单次检测可以达到的非空白检测响应量对应的分析物量，通常估计95 和99．7 两种可能性。当以空白检测管的均值为检测的起点0时，那么有99．7 可能性。现计算99．7 可能性的检测低限LLD一空白+3s空白一26．7+3×6．22—45．36。结果表明空白样本测定的RLUs为45．36，此RLUs为分析检测系统的噪声或空白响应量，也就是HBsAg的检测低限。表1中可见其检测低限所产生的RLUs相当于实验样品中X2(0．4 ng／mL)所产生的RLUs。故本检测室HBsAg的检测低限为0．4 ng／mL×(45．36／43．6)一0．4 ng／mL(试剂说明书给出的HBsAg分析灵敏度应不高于1．0 ng／mL)。

2．3功能灵敏度 功能灵敏度为日间重复CV=2O 时对应的实验样本浓度。它代表的是一个定量的报告低限 J。将X1～x7各浓度的RLUs均值减去空白样本X0的RLUs均值定义为△RLUs，计算S(RLUs)，CV(RLUs)值，结果见表2。绘制浓度与CV的关系曲线图，以HBsAg检测浓度为x轴，CV(RLUs)为Y轴。从曲线上查阅CV(RI Us)为20 所对应的HBsAg检测浓度为1．0 ng／mL，即为FS(试剂说明书给出的FS应不高于1．2 ng／mL）。

3 讨  论

    亚太肝脏研究学会《慢性乙型肝炎治疗指南~2008版指出，中国属于乙型肝炎病毒感染高流行区，乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带总人数已超过1亿多人，其中慢性乙型肝炎患者2000多万人，约占人口总数的1．6 左右。血清HB—sAg作为HBV感染的标志物，其发现已有4O多年的历史，迄今仍作为HBV感染的重要诊断标准。HBsAg血清学转换提示慢性乙型肝炎(CHB)基本治愈【- 。另外，乙型肝炎病毒患者的早期诊断对治疗效果及预后的影响很大，早期患者的HBsAg浓度一般较低，能找到合适的方法对低浓度的HBsAg进行检测，对早期乙型肝炎患者的发现具有重大的临床意义 。可见，HBsAg检测在乙型肝炎的诊断和治疗中均起着
重要的作用。

    目前，临床测定HBsAg的方法较常用的是酶联免疫吸附试验(ELISA)，时间分辨免疫荧光法(TRFIA)，化学发光法3种方法。ELISA主要有以下缺点：无法定量，灵敏度低，由检测原理带来的前带现象无法解决，易传染，无法完成HBV感染的动态观察及对低水平人群容易造成漏检[8]。TRFIA法和免疫化学发光法(ICMA)测定HBsAg，灵敏度高，可以定量，可以动态观察HBV感染，而且在抗HBV治疗过程中，检测HBsAg定量可反映抗病毒疗效l9]，所以这两种方法均逐渐得到推广应用。

     检测系统的分析性能能够满足临床要求是医学实验室认可和“检验结果互认”的根本保证。目前，各实验室对不同检测系统或检测项目等进行了性能评价  。检测低限是能测出样本中分析物的最小量，检测系统或方法对小于或等于检测低限的分析物量只能报告“无分析物检出”，因此检测低限实际上是能够将分析物于本地噪音及空白响应量区分的待检测物的最低浓度值。本实验结果显示，Chemclin 600检测系统测定HBsAg的最低检测限为0．4 ng／mL，与厂家试剂说明书上列出的检测低限(<1．0 ng／mL)吻合，说明仪器检测系统分析灵敏度稳定。功能灵敏度则是指在实际检测中能够测到的待测物的最低浓度值，是以日间重复CV为2O 时对应实验样品具有的浓度。它用于确定检测系统可报告的最低限值 ，区分从有到无的分析能力，所以更有临床价值。对低浓度特别有意义的项目，确定其检测限对疾病的诊断或治疗监测有重要意义。本实验结果显示，Chemclin 600检测系统测定HBsAg的功能灵敏度验证值为1．0 ng／mL，与厂家试剂说明书标明的功能灵敏度(<lI 2 ng／mL)吻合，说明仪器检测系统功能灵敏度稳定。检测系统的灵敏度高低反映了仪器性能的差别 ，本实验结果说明了Chemclin 600化学发光自动免疫分析仪对HB—sAg的分析灵敏度和功能灵敏度均较高，与厂商的资料一致，适合于临床实验室常规应用。 #p#分页标题#e#